T细胞因其在免疫系统中发挥的关键作用，一直备受研究人员和临床医生的关注。近年来，T细胞已从实验室走向肿瘤学领域，例如CAR-T疗法以及疫苗研发。因此，T细胞亚群的分离对研究人员至关重要，因为免疫系统中存在多种不同类型的T细胞，它们在免疫系统中发挥着不同的作用。然而，分离特定的T细胞亚群可能颇具挑战性，因为这需要使用多种表位结合抗体。
荧光激活细胞分选仪是应对这一挑战的绝佳工具，它使研究人员能够使用多种荧光抗体对细胞进行标记，并轻松识别细胞群体中的不同T细胞亚群。传统流式分选仪面临的一个挑战是，其采用的高压分选原理会产生显著的剪切应力，导致细胞存活率降低。此外，这些传统分选仪采用的非一次性流体系统还可能导致样本之间的交叉污染，或因微生物污染而影响样本质量。
WOLF G2 单细胞柔性分选系统是一款温和的微流控细胞分选仪，配备2台激光器，提供3种配置：488/405 nm、488/561 nm 和 488/637 nm；并支持多达9个荧光通道。此外，WOLF G2 单细胞柔性分选系统能够同时分选2个目标细胞群，并通过N1单细胞分配器将单个细胞分选至96孔或 384 孔板中。最重要的是，G2在低于2 psi的压力下进行细胞分选，并采用全一次性流体系统，从而确保高细胞存活率，并杜绝交叉污染或微生物滋生。在本文中，我们使用配备488/637nm和488/405nm激光配置的G2，同时识别并分选CD4+和CD8+ T细胞。
首先通过BSC/FSC散点图识别外周血单核细胞（PBMCs），并进一步利用CD45标记物识别白细胞。随后，通过CD45+门限筛选出CD3+和CD19+细胞，最后通过CD3+门限筛选出CD4+和CD8+ T细胞（下图）。
使用488/637 nm配置的WOLF G2流式细胞仪，对CD4+和CD8+ T细胞进行分选，其平均纯度分别为93 ± 5.3%和91 ± 3.7%。这相当于在外周血单核细胞（PBMC）群体中，CD4 T 细胞富集了3.2倍，而CD8 T细胞富集了5倍。
在采用488/405 nm配置的WOLF G2系统中，同样观察到高纯度的CD4+和CD8+ T细胞，其平均纯度分别为94±2.5%和94±2.5%。这导致外周血单核细胞（PBMC）群体中CD4 T细胞的富集倍数为3.3倍，而CD8 T细胞的富集倍数则达到8.5倍。
WOLF G2 488/637 nm 激光配置最多支持7个荧光通道，而WOLF G2 488/405 nm激光 配置则最多支持9个荧光通道，并配备温和分选技术和一次性流体系统。本文中采用5种荧光标记物，从外周血单核细胞（PBMC）群体中准确识别出了CD4+及CD8+ T细胞。此外，同时分选出了CD4+和CD8+ T细胞，两种配置方案均实现了平均纯度> 90%。该实验展示了 WOLF G2 单细胞柔性分选系统的广泛应用能力，具有强大的分析分选功能和分选潜力。
