图1评估TPT3：NAM碱基对的逆转录的实验流程示意图。带有非天然核苷酸rTPT3或rNAM的RNA对具有不同的逆转录酶进行逆转录。用不同的方法分析了逆转录的加工性（请参阅上图，逆时针）：通过PAGE检测全长与截短的cDNA比率，通过LC-MS和Sanger测序检测LC-MS融合cDNA，使用switchSENSE®技术及模拟SELEX循环的动力学测量，以探索UB保留周期数。
特别的，在本研究中（见图2）利用switchSENSE®技术及heliX+设备对逆转录过程进行实时监测，使得MMLV和SSIV RT与RNA模板的结合和活性的动力学得以表征。
本研究通过在switchSENSE®芯片上构建检测体系，实现了对UBP掺入的动态量化测量。因此switchSENSE®是研究其他逆转录酶和聚合酶活性强有力的技术手段。
图2 switchSENSE®生物芯片上的MMLV和SS IV RT活性测定流程示意图。（A）芯片测试示意图。首先，配体通过杂交固定在单个链锚定（1）。随后，将RT与芯片核酸结合（2），然后注射dNTPS或DNTPS + dNaM TP以启动逆转录（3）。最后，芯片被再生（4）。（B）在存在或不存在不同模板的dNaM TP的情况下，每个MMLV和SS IV RT的相对振幅，包括其标准偏差（N≥3），这些偏差来自延伸幅度的荧光变化。将48-1XRTPT3、48-2XRTPT3和24-NT RNA的值标准化为48-NT未修饰的RNA。（C）在结合阶段，MMLV的荧光变化信号。（D）在不同dNTP浓度下逆转录（伸长）期间荧光变化的增加。（E）在底物浓度上绘制观察到的速率以获得催化速率图 Kcat。
