同腾睿杰（上海）生物科技有限公司

全长单细胞 RNA 测序（scRNA-seq）在转录组学领域被视为金标准，它具有高灵敏度且能够捕捉到转录本的复杂性。然而，传统实验方案或工作流程中所使用的文库制备方法处理过程复杂且通量低。

现在有另外一种选择，我们采用 plexWell™ Rapid Single Cell 试剂盒（Rapid SC Kit）中的 plexWell™ Rapid Single Cell Mini Kit 来构建一个微型化的 scRNA-seq 工作流程，以实现高通量生成高质量的测序数据。在这个过程中，试剂盒中互补 DNA（cDNA）生成部分通过 I.DOT进行了微型化处理，而用于测序的文库制备则在单个管中以全体积进行操作。我们使用人类外周血单个核细胞（hPBMCs）来比较微型化 Rapid SC 工作流程和全体积 Rapid SC 工作流程与其他常见的全长工作流程（SMART-seq2、SMART-seq3 和 Takara SMART Seq Single Cell）的效果。通过改进文库制备反应和使用 I.DOT微型化处理，微型化 Rapid SC 工作流程生成 cDNA 的时间减少了约 20%至 25%，与传统方法相比，检测到的基因数量比全体积 Rapid SC 工作流程多 25%，并且其性能也优于其他工作流程。

我们介绍了一种 plexWell 快速单细胞试剂盒（Rapid SC 试剂盒）工作流程（图 1），其中 cDNA 生成被微型化并自动化，用于在一天内生产适合测序的全长转录组文库。与 SMART-seq2 和其他传统工作流程相比，这种微型化的 Rapid SC 工作流程的 cDNA 生成方法能节省试剂并缩短孵育时间，从而减少了文库制备时间。Rapid SC 技术的独特性，如自动归一化，减少了需要进行质量控制（QC）测试的样本数量，并且在下一代测序（NGS）文库制备之前不需要标准归一化。在 Rapid SC 工作流程的早期阶段就对 cDNA 样本进行了条形码标记。NGS上机前使用 I.DOT 整合96个文库也能使库体积减少1/5。快速 SC 试剂盒与自动化 I.DO（384 孔板或更高规格）的结合提高了处理效率，并显著降低了成本，同时还能生成高质量的测序数据。

工作流程：

单细胞分离
cDNA 准备、纯化、质量控制和定量
NGS 文库制备

I.DOT特点

非接触式

I.DOT利用压力喷射技术将源液无接触分配到目标板，减少溶液从样品板转移到实验板中间过程的交叉污染，节省枪头等耗材，免去枪头更换时间。

兼容多种溶液种类

可按需选择多种液体类别进行分配，包括水、PCR缓冲液、引物、药物、核酸、酶、蛋白溶液、DMSO（100%）、甘油（50%）、活细胞、3D微球等。

灵活性高

I.DOT可更换样品板；8个加样通道可独立控制或协同使用；软件智能计算最优分液流程；每次实验可实现1-384种不同液体的分配移液；可从任意样品孔向任意实验孔分配；根据实验需求选择任意类型SBS实验板，包括96，384和1536孔板，或一些客户定制板，多种方式提升系统的灵活性。

速度快

向每孔分配10nl溶液，96孔板仅需10秒，384孔板仅需20秒。

死体积低

Pure Well样品孔特殊存储设计使孔内剩余体积<1μL。

液滴实时验证

I.DOT的Drop Detection功能可实时监测分液过程中的每一滴液滴，以及液滴中的气泡，这一简单有力的工具确保了液滴的有效分配和实验的优化。Drop Detection通过嵌置在样品板下方的电路板形成96个微小的光路屏障，检测不同位置样品孔中喷射出的液滴通过光路屏障时光强度的变化。在液体分配结束后，Drop Detection可提供基于颜色或文本的监测数据。

同腾睿杰（上海）生物科技有限公司作为CYTENA I.DOT中国总代理商，为您提供优质的售前售后服务。

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