
iPSC是非常脆弱敏感的细胞,传统流式分选中的机械应力会通过激活与细胞应激或分化相关的基因掩盖或改变scRNA-seq结果。因此,在分选细胞时尽量减少机械应力是很重要的。此外,在cDNA产生和文库制备之前减少死细胞和碎片,可以提高cDNA文库的质量。荧光激活细胞分选是用于富集特定细胞群同时避免死细胞和碎片的常用技术。然而,使用高压喷嘴液滴分选的传统细胞分选方法会对细胞产生机械剪切应力;诱导基因表达变化和/或RNA降解。
在细胞生物学和药物研发中,传统研究流程需在微孔板、离心管、PCR板等多平台间转移样本,导致实验变异大(跨平台误差>20%)、核酸损失高(低细胞数样本回收率<50%)。例如,基因表达分析需多次转移样本,单细胞核酸损失率高达70%。本篇文章中德国卡尔斯鲁厄理工学院团队开发的“Cells-to-cDNAonChip”技术,通过液滴微阵列(DMA)平台与I.DOT非接触式纳升级分配技术的结合,首次实现从活细胞培养到cDNA合成的全流程纳升级集成,将试剂消耗降低至传统方法的1/100,操作时间缩短33%。
非自然的碱基对(UBP)增强了人造核酸的化学多样性,因此可以通过体外选择来产生新的适体和催化核酸。但是,由于缺乏方法,UBPS的逆转录是RNA适体选择的关键步骤,尚未充分表征。研究者提出了一系列多功能测定法,以对疏水性非天然碱基对的代表——TPT3:NAM碱基对的逆转录为研究方向。在RNA的体外进化中确定了四种不同的逆转录酶(RT)的UBP的保真度。在RNA在体外筛选过程中,使用新型的基于点击化学的电动性转移测定法研究了TPT3:NAM对的保留。对逆转录动力学的实时监测显示,处理TPT3:NAM